При вскрытии кроликов полный мочевой пузырь

К.Е. Коптяева, ветеринарный врач-патоморфолог отдела гистологии и патоморфологии,

Ж.Ю. Устенко, ветеринарный врач-патоморфолог отдела гистологии и патоморфологии,

Е.В. Беляева, ветеринарный врач-патоморфолог отдела гистологии и патоморфологии,

Я.А. Гущин, руководитель отдела гистологии и патоморфологии,

М.Н. Макарова, доктор медицинских наук, директор,

В.Г. Макаров, доктор медицинских наук, профессор, зам. директора

НПО «Дом Фармации»

188663, Россия, Ленинградская обл., Всеволожский р-н, г.п. Кузьмоловский, ул. Заводская, д. 3, корп. 245

Е-mail: koptyaeva.ke@doclinika.ru

Представлено 5-е сообщение из цикла статей по методологии вскрытия и извлечения органов лабораторных животных, в которое подробно описывается и иллюстрируется методика последовательного и полного вскрытия и извлечения органов лабораторных кроликов и хорьков. Кролики подходят для проведения длительно текущих исследований, а также они – единственные лабораторные грызуны, с помощью которых можно получать рекомбинантные фармацевтические белки и исследовать перорально или внутрижелудочно вводимые лекарственные формы без нарушения целостности таблеток. Кроме того, кроликов широко используют для разработки и изучения новых хирургических методов, физиологических тестов и исследования различных видов токсичности для тестирования лекарственных препаратов. На хорьках изучают различные вирусные и бактериальные заболевания, а также патологии органов слуха, органов зрения, рвотный рефлекс из-за сходства многих анатомических, метаболических и физиологических особенностей с человеком.

В статье описана методика некропсии от процедуры внешнего осмотра трупа, последовательного вскрытия и осмотра грудной и брюшной полостей, и до извлечения органов, выделения различных костных препаратов. Описаны и проиллюстрированы возможные методы извлечения органов ротовой полости (в том числе извлечение языка и глотки), всех органов грудной, брюшной и тазовой полостей. Рассмотрен способ извлечения головного мозга, метод выделения препаратов грудной кости для дальнейшего гистологического исследования костного мозга и верхней челюсти для гистологического исследования носовых ходов. Представлена процедура подготовки участка спинного мозга к фиксации в формалине без извлечения его из позвоночного канала. Продемонстрированы методы извлечения глаз вместе со слезной железой и веками единым органокомплексом, а также извлечения мышц и прилежащих к ним периферических нервов. Способы извлечения органов и последовательность выполняемых действий, представленные в данной статье, обеспечивают минимизацию повреждений извлекаемых органов, предотвращают их загрязнение с целью недопущения возникновения некоторых артефактов, выявляемых при последующем гистологическом исследовании.

Введение

Кролики и хорьки – стандартные биологические модели для изучения свойств лекарственных препаратов (токсичности, фармакокинетики), а также моделирования некоторых патологий человека и других животных, как врожденных, так и приобретенных.

Лабораторные кролики подходят для длительно текущих исследований, например для оценки метаболизма липопротеидов, моделирования и изучения сердечно-сосудистых патологий, в частности атеросклероза, гипертрофической кардиомиопатии. Кролики – единственные лабораторные грызуны, с помощью которых можно получать рекомбинантные фармацевтические белки. Также они являются уникальными моделями для исследования перорально или внутрижелудочно вводимых лекарственных форм, так как только кроликам можно ввести таблетки без нарушения целостности их оболочек. Кроме того, лабораторных кроликов используют для разработки и изучения новых хирургических методов, физиологических тестов и исследования различных видов токсичности для тестирования лекарственных препаратов [8].

Хорьки чаще всего выступают в качестве тест-системы для изучения вирусных заболеваний вследствие их высокой восприимчивости, в частности к вирусу гриппа. Помимо этого, на хорьках нередко проводят исследования органов слуха, зрения, рвотного рефлекса, бактериальных инфекций. В последнее время хорьки все чаще предлагаются в качестве альтернативы более крупным лабораторным животным – собакам и приматам по причине сходства многих анатомических, метаболических и физиологических особенностей с человеком [5].

Цель данной работы – разработка методики вскрытия и извлечения органов лабораторных кроликов и хорьков.

Данная методика разрабатывалась в НПО «Дом Фармации» на самцах и самках кроликов (n=15) и хорьков (n=6). Масса исследованных животных составляла: самцов кроликов – 2,0-5,0 кг, самок кроликов – 2,0-5,0 кг, самцов хорьков – 0,5-1,0 кг, самок хорьков – 1,0-2,0 кг. Для исследования использовали животных, подлежащих эвтаназии в ходе текущих экспериментов. Специально для отработки методики некропсии животных не эвтаназировали.

Животные были подвергнуты эвтаназии с помощью передозировки анестетиком [7, 9], а именно препаратами «Ксила» и «Золетил», вводя максимальный объем вещества для наркотизации исследуемых животных. После установления факта смерти выполняли некропсию с извлечением органов и тканей.

Методика вскрытия и извлечения органов

1. Провести общий осмотр животного на наличие внешних изменений кожного покрова, слизистых оболочек, обнаружения любого рода повреждений.

2. Положить труп животного на спину и зафиксировать конечности при помощи резинок в устройстве для фиксации (рис. 1, а).

3. Обильно смочить шерстный покров шеи, грудной и брюшной стенки водой.

4. Пинцетом захватить и приподнять кожу с подлежащей подкожной клетчаткой в каудальной части живота, надрезать ее и сделать продольный разрез по белой линии живота от паха до основания нижней челюсти таким образом, чтобы брюшная стенка осталась неповрежденной (рис. 1, б, в).

5. Сделать по 2 разреза кожи в области паха от средней линии к конечностям.

6. Отсепарировать кожу в области брюшной стенки у кроликов – тупым концом ножниц или аккуратно, стараясь не сдавливать брюшную стенку, отделить кожу пальцами; у хорьков – отсепарировать кожу и подкожную клетчатку ножницами или скальпелем (рис.1, г), далее оттянуть и зафиксировать кожные лоскуты резинками (рис. 1, д).

Рис. 1. Общий план вскрытия на примере хорька: а – помещение животного в устройство для фиксации; б, в – продольный разрез по белой линии живота; г – отделение кожи с подкожной клетчаткой при помощи скальпеля; д – фиксация кожных лоскутов

7. Для вскрытия брюшной полости необходимо сделать разрез мышечной стенки от паха вдоль средней линии, приподняв пинцетом участок брюшной стенки (рис. 2, а, б).

8. Грудную полость необходимо вскрыть 2 разрезами (слева и справа) по бокам от грудины (по средне-подмышечной линии) косо краниально, перерезая ребра и мягкие ткани (рис. 2, в, г).

Рис. 2. Вскрытие брюшной и грудной полостей на примере хорька: а, б – разрез брюшной стенки по белой линии живота; в, г – разрез грудной стенки справа и слева; д – отделение грудной кости; е – общий вид после удаления грудной кости

9. Для исследования костного мозга отобрать грудную кость целиком, отделив от нее мечевидный отросток, ребра и мягкие ткани (рис. 3).

Рис. 3. Извлечение грудины на примере хорька: а, б – отделение ребер и мягких тканей; в – грудная кость после извлечения и отделения ребер и мягких тканей

10. Извлечь грудную долю тимуса, расположенную между листками предсердечного средостенья (рис. 4).

Рис. 4. Извлечение тимуса на примере хорька: а – отделение тимуса; б – тимус после извлечения

11. Извлечь сердце, перерезав удерживающие его сосуды (рис. 5).

Рис. 5. Извлечение сердца на примере хорька: а – перерезка сосудов, удерживающих сердце; б – сердце после извлечения

12. Извлечь нижнечелюстные слюнную железу и лимфатические узлы (рис. 6).

Рис. 6. Нижнечелюстные лимфатические узлы и слюнные железы (хорек): а – топографическое расположение органов: слюнные железы обведены красным пунктиром, лимфатические узлы – синим пунктиром; б – извлечение слюнных желез; в – извлечение лимфатических узлов; г – органы после извлечения и отделения окружающих тканей (сверху лимфатические узлы, снизу – слюнные железы)

13. Удалить мышцы, лежащие над трахеей (рис. 7, а, б) и извлечь гортань с трахеей, щитовидной и паращитовидной железой (рис. 7, в-е)

Рис. 7. Извлечение гортани с трахеей, щитовидной и паращитовидной железой на примере хорька: а, б, в – Удаление лежащих над трахеей мышц; г, д – Захват и перерезка гортани; е – Органокомплекс после извлечения: трахея (красная стрелка), щитовидная и паращитовидная железы (синий пунктир)

14. Для извлечения языка и глотки сделать разрезы дна ротовой полости скальпелем (рис. 8, а, б). После этого захватить отсепарированные мышцы и язык и оттянуть каудально (рис. 8, в). Далее сделать надрез в области твердого неба у входа в глотку, сохранив целостность глотки (рис. 8, г). Отделить язык вместе с глоткой (рис. 8, д, е).

Рис. 8. Извлечение языка и глотки на примере хорька: а, б – разрез дна ротовой полости; в, г – отделение глотки; д – отделение языка и глотки; е – органокомплекс после извлечения

15. Для извлечения легких, участка трахеи и пищевода перерезать зафиксированные пинцетом трахею и пищевод в области шеи (рис. 9, а). Затем отделить пищевод от аорты, аккуратно подтягивая органокомплекс краниально, после чего перерезать трахею и пищевод в области диафрагмы (рис. 9, б) и извлечь органокомплекс (рис. 9, в).

Рис. 9. Извлечение легких на примере хорька: а − перерезка трахеи и пищевода в области шеи; б − перерезка трахеи и пищевода в области диафрагмы; в – извлеченный органокомплекс после удаления пищевода

16. Отделить пищевод от извлеченного ранее органокомплекса (рис. 10).

Рис. 10. Извлечение пищевода на примере хорька: а – отделение пищевода от извлеченного ранее органокомплекса; б – пищевод после извлечения

17. Отделить оставшуюся в грудной полости аорту от позвоночника (рис. 11).

Рис. 11. Извлечение аорты на примере хорька: а – отделение аорты от позвоночника; б – аорта после извлечения

18. Извлечь селезенку, расположенную в области левого подреберья брюшной полости (рис. 12, а, б). Далее отделить селезенку от жировой ткани (рис. 12, в, г).

Рис. 12. Извлечение селезенки на примере примере хорька: а, б, в – извлечение селезенки; г – селезенка после извлечения

19. Извлечь участок поджелудочной железы, лежащий в брыжейке двенадцатиперстной кишки (рис. 13).

Рис. 13. Извлечение поджелудочной железы на примере хорька: а, б – извлечение поджелудочной железы; в – поджелудочная железа после извлечения

20. Извлечь желудок, отделив его в краниальной части от пищевода (рис. 14, а), а в каудальной – от двенадцатиперстной кишки (рис. 14, б, ж). У хорька: сделать разрез желудка по большой кривизне (рис. 14, в, г) и прополоскать в физиологическом растворе (рис. 14, д, е), освободив от содержимого. У кролика: сделать разрез желудка по большой кривизне (рис. 14, з), после чего удалить содержимое (большое количество растительного корма) и прополоскать в физиологическом растворе (рис. 14, и, к), освободив от остатков кормовых масс. Обратите внимание, что после вскрытия желудка нельзя прикасаться к его слизистой оболочке, для промывания захватить его пинцетом с внешней стороны (со стороны серозной оболочки).

Рис. 14. Извлечение желудка на примере хорька: а – отделение желудка от пищевода; б – отделение желудка от двенадцатиперстной кишки; в, г – разрез желудка по большой кривизне; д – полоскание в физиологическом растворе; е – желудок после извлечения и промывания. извлечение желудка на примере кролика: ж – отделение желудка от двенадцатиперстной кишки; з – разрез по большой кривизне, удаление содержимого; и – промывание желудка в физиологическом растворе; к – желудок после извлечения и промывания

21. Извлечь фрагменты тонкой и толстой кишки длиной 3-4 см: тонкую – отступив от желудка около 3 см (рис. 15, а, б); толстую – у хорька извлечь участок, отступив краниально от прямой кишки около 3 см (рис. 15, в, г); у кролика – извлечь часть восходящей ободочной кишки (рис. 15, д, е). После извлечения отделить от окружающих тканей и освободить от содержимого, прополоскав в физиологическом растворе.

Рис. 15. Извлечение фрагментов кишечника на примере хорька: а – иссечение фрагмента тонкой кишки (двенадцатиперстной, отходящей от желудка); б – фрагмент тонкой кишки после удаления окружающих тканей и полоскания в физиологическом растворе; в – иссечение фрагмента толстой кишки (участок перед прямой кишкой); г – фрагмент толстой кишки после удаления окружающих тканей и полоскания в физиологическом растворе. Извлечение участка толстой кишки на примере кролика: д – извлечение участка восходящей ободочной кишки; е – фрагмент толстой кишки после удаления окружающих тканей и полоскания в физиологическом растворе

22. Извлечь печень вместе с желчным пузырем. Для этого перерезать удерживающие орган серозные связки: венечную, прикрепляющуюся к диафрагме, почечно-печеночную, желудочно-печеночную и печеночно-двенадцатиперстную (рис. 16, а-в). У кроликов и хорьков после взвешивания отбирается по кусочку размером около 3х3 см от каждой доли, а также участок, к которому прилежит желчный пузырь.

Рис. 16. Извлечение печени на примере хорька: а, б – иссечение связок, удерживающих печень; в – печень и желчный пузырь (указан стрелкой) после извлечения

23. Извлечь надпочечники (рис. 17, а) и отделить от окружающей жировой ткани (рис. 17, б, в). Извлечь почки (рис. 17, г) и отделить от окружающей жировой ткани (рис. 17, д, е).

Рис. 17. Извлечение надпочечников и почек на примере хорька: а – извлечение надпочечников; б-надпочечники после извлечения и удаления окружающих тканей; в – извлечение почек; г – отделение окружающих тканей; д – почки после извлечения и удаления окружающих тканей

24. При необходимости исследования мочи провести ее отбор при помощи шприца перед иссечением мочевого пузыря (рис. 18, а). Извлечь орган, перерезав шейку пузыря (рис. 18, б).

Рис. 18. Забор мочи пункцией мочевого пузыря и его последующее извлечение на примере хорька: а – пункция мочевого пузыря; б – извлечение мочевого пузыря; в – мочевой пузырь после извлечения

25. У самок: извлечь правый и левый яичники (рис. 19, б); извлечь матку – шейку, тело и рога (рис. 19, в-д).

Рис. 19. Извлечение органов половой системы самок на примере кролика: а – общий вид половых органов (яичники обведены синим пунктиром); б – извлечение яичников; в, г – извлечение рогов матки; д – отделение тела матки; е – яичники и матка после извлечения

26. У самцов: отделить семенники вместе с придатками (рис. 20, а, б), отделить придатки от семенников (рис. 20, в, г). Извлечь предстательную железу (рис. 20, д, е).

Рис. 20. Извлечение органов половой системы самцов на примере кролика: а – топографическое расположение семенников (синий пунктир) и придатков; б – отделение семенников вместе с придатками; в, г – отделение придатков; д – топографическое расположение предстательной железы (синий пунктир); е – иссечение предстательной железы; ж – извлеченные семенники и придатки; з – извлеченная предстательная железа

27. Извлечь глаз вместе с веками, слезной железой и зрительным нервом. Сделать круговой надрез кожи вокруг глаза (рис. 21, а). Далее, удерживая веки пинцетом, постепенно надрезать подлежащие ткани (рис. 22, б, в), извлекая глазное яблоко, зрительный нерв и прилежащую слезную железу (рис. 22, г).

Рис. 21. Извлечение глаза с веками, слезной железой и зрительным нервом на примере хорька: а – круговой разрез кожи; б, в – извлечение органокомплекса из орбиты; г – органокомплекс после извлечения (1 – участок слезной железы, 2 – участок зрительного нерва, 3 – глазное яблоко)

28. Извлечение головного мозга осуществляется следующим образом. Отсепарировать кожу и подлежащие мягкие ткани от затылка до переносицы (рис. 22, а-д). Вскрыть черепную коробку двумя распилами (рис. 22, е), соединив их сзади на большом отверстии затылочной кости, а спереди – как показано на рис. 22, ж (для хорьков) и рис. 22, з (для кроликов). После вскрытия черепа удалить черепную коробку и извлечь головной мозг (рис. 23, и-л).

Рис. 22. Извлечение головного мозга: а-г – удаление кожи и подлежащих мышц у хорька; д – разрез мягких тканей в области большого отверстия затылочной кости у хорька; е, ж – направление распилов черепа у хорька; з – направление распилов черепа у кролика; и − извлечение головного мозга; к – головной мозг хорька после извлечения; л – головной мозг кролика после извлечения

29. Для лучшей фиксации слизистой оболочки носовой полости необходимо предварительно промыть носовые ходы раствором фиксатора (рис. 23, а). Отбор тканей носовых ходов и синусов производится следующим образом: после извлечения головного мозга отделить от черепа кожу и мышцы (рис. 23, б). Осторожно, избегая повреждения рук верхними резцами, выполнить поперечный распил верхней челюсти на уровне глаз (рис. 23, в), тем самым отделяя препарат носовых ходов (рис. 23, г).

Рис. 23. Отделение препарата носовых ходов на примере хорька: а – промывание носовых ходов хорька раствором фиксатора (10% забуференный формалин); б – удаление мягких тканей; в – поперечный распил верхней челюсти на уровне глазных орбит; г – подготовленный к фиксации препарат носовых ходов

30. Гипофиз (рис. 24) фиксируется вместе с черепом после извлечения головного мозга, удаления мягких тканей, нижней челюсти и препарата носовых ходов.

Рис. 24. Череп хорька после извлечения мозга, гипофиз обозначен желтым пунктиром

31. Извлечь необходимые скелетную мышцу и периферический нерв. Для этого сделать глубокий разрез кожи, отпрепарировать кожу и фасции, затем извлечь скелетную мышцу и нерв (рис. 25).

Рис. 25. Извлечение скелетной мышцы и периферического нерва на примере хорька -поверхностная ягодичная мышца, седалищный нерв: а, б – отделение кожи и подкожной клетчатки; в – мышца и нерв; г – отделение мышцы с нервом; д – удаление жировой ткани; е -мышца и прилежащий к ней нерв (желтые стрелки) после извлечения

32. Фиксация отделов спинного мозга производится вместе с позвоночным столбом без извлечения мозга из спинномозгового канала. При необходимости, предусмотренной планом исследования, позвоночник извлечь целиком, перед фиксацией разделив его на соответствующие анатомические отделы; в том случае, если такой необходимости нет – извлечь участок поясничного отдела (3-5 сегментов) (рис. 26, а, б). Для подготовки спинного мозга к фиксации необходимо рассечь вдоль позвоночника мышцы спины, пересечь с обеих сторон поперечные отростки позвонков и ребра, после чего максимально очистить позвоночный столб от мягких тканей (рис. 26, в)

Рис. 26. Извлечение позвоночника на примере хорька: а, б – направление распилов позвоночника; б – участок позвоночника, подготовленный для фиксации

Заключение

Предложена методика, которая позволяет:

• обеспечить полное последовательное вскрытие лабораторных животных для досконального исследования всех полостей, систем органов и различных частей тела животного;
• провести извлечение всех необходимых органов и тканей, в том числе предусмотренных планом исследования;
• минимизировать повреждения структур и избежать загрязнения в процессе некропсии органов и тканей, исключая возникновение некоторых артефактов при последующем гистологическом исследовании.

Источник